Klonierung ist in der Molekularbiologie der Überbegriff für Methoden zur Gewinnung und identischen Vervielfältigung von Desoxyribonukleinsäure. 1 Unter einer Klonierung bzw. dem Klonieren von DNA versteht man den Einbau eines definierten DNA Abschnittes in einen Vektor, z.B ein bakterielles Plasmid. 2 Bei der Plasmidklonierung wird ein Plasmid (beispielsweise pUC19) im Zuge eines Restriktionsverdaus mit Hilfe von speziellen Restriktionsenzymen versetzt. 3 Schritt: DNA-Abschnitt und Plasmid zerschneiden (Restriktion) · Schritt: Plasmid wieder „zusammenkleben“ (Ligation) · Schritt. 4 Plasmid in Bakterien einbringen. () Bei der Klonierung vervielfältigst du bestimmte DNA-Abschnitte. Wie genau das funktioniert, erfährst du in diesem Artikel! Wenn du den Ablauf besser anhand von Bildern verstehst, gibt es hier das Video für dich! Inhaltsübersicht. Klonierung einfach erklärt. zur Stelle im Video springen. (). 5 Many scientists around the world have generated and deposited their own Gateway-compatible plasmids with Addgene. These can be used to express genes in a variety of model organisms. Use the links below to find Gateway plasmids for your organisms of interest: Find Gateway cloning plasmids here!. 6 Colonies don’t contain a plasmid: Antibiotic level used was too low: Increase the antibiotic level on plates to the recommended amount; Use fresh plates with fresh antibiotics; Satellite colonies were selected: Choose large, well-established colonies for analysis; Colonies contain the wrong construct: Recombination of the plasmid has occurred. 7 Addgene’s plasmids are used with a wide variety of restriction enzyme-based cloning methods. Each method has its own pluses and minuses, but Golden Gate cloning has been especially useful within both the synthetic biology and genome engineering fields. We’ll walk you through how to apply this precise and easy-to-use system to your cloning efforts. 8 Why Gibson Cloning? No need for specific restriction sites. Join almost any two fragments regardless of sequence. No scar between joined fragments. Fewer steps. One tube reaction. Can combine many DNA fragments at once. Procedure. Design your plasmid and order primers (see figure to the right). 9 Choosing a Molecular Cloning Technique. Choosing Your Perfect Plasmid Backbone. Topics: Plasmids , Plasmid Cloning, Plasmids. Sequence and ligation independent cloning (SLIC) lacks the strict requirements of many standard cloning techniques. Learn how to use SLIC in this post. transformation klonierung 10